FISH技术(fluorescence in situ hybridization),即荧光原位杂交技术。
分子杂交是依据DNA双链碱基互补、变性和复性原理,用已知碱基序列的单链核酸片段作为探针,检测样本中是否存在与其互补的同源核酸序列。
原位杂交是分子杂交的一种,用已标记的核酸探针与组织切片或细胞中的待测核酸中的互补序列杂交,从而对组织细胞中的核酸进行定性、定位和相对定量分析。
荧光原位杂交采用荧光标记的DNA探针,利用探针与检测样本中DNA碱基对的互补性,在探针与标本的DNA杂交后,利用荧光显微镜检测荧光信号而得出结果,从而检测细胞、组织样本中的染色体和基因异常。
FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→(染色体显带)→荧光显微镜检测→结果分析。
1、荧光试剂和探针经济、安全;
2、探针稳定,一次标记后可在两年内使用;
3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确;
4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列,其灵敏度与放射性探针相当;
5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列;
6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化,也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。
染色体的识别
特异性融合基因的检测
新基因定位
染色体结构异常